항체 클로닝 Ligation & Molar Ratio 계산기
Vector 및 Insert(항체 유전자)의 크기와 농도를 바탕으로 최적의 라이게이션 몰비와 반응 믹스 볼륨을 참고용으로 산출합니다.
1. Vector & Insert DNA 조건 설정
클로닝할 벡터와 삽입할 유전자(항체 VH/VL, scFv, IgG 도메인 등)의 염기쌍(bp) 크기와 사용량을 입력하세요.
2. 피펫팅 볼륨(Pipetting Volume) 계산용 농도 설정 (선택)
현재 보유 중인 DNA 정제 농도(ng/µL)를 입력하면 실제 튜브에 분주할 마이크로리터(µL) 부피를 자동 계산합니다.
항체 유전자 클로닝 및 라이게이션 설계 가이드
성공적인 T4 DNA Ligase 반응을 위한 몰비(Molar Ratio) 설정 원칙입니다.
• 표준 점착 말단(Sticky/Cohesive End) 라이게이션: Insert : Vector = 3 : 1
가장 일반적으로 사용되는 비율로, 벡터의 자가 원형화(Self-ligation)를 억제하고 적절한 재조합 수율을 확보합니다.
• 평활 말단(Blunt End) 또는 단편 크기가 작을 때: Insert : Vector = 5 : 1 ~ 7 : 1
결합 확률이 상대적으로 낮으므로 인서트의 몰 농도를 높여 라이게이션 효율을 보상합니다.
• 인서트가 벡터보다 큰 경우: Insert : Vector = 1 : 1 ~ 2 : 1
인서트 과다로 인한 비정상 다합체 형성을 방지하기 위해 비율을 낮춥니다.
• 핵심 공식:
$\text{Insert Mass (ng)} = \frac{\text{Vector Mass (ng)} \times \text{Insert Size (bp)}}{\text{Vector Size (bp)}} \times \text{Molar Ratio}$
핵심 공식 · Insert Mass (ng) = [Vector Mass (ng) × Insert Size (bp) / Vector Size (bp)] × Molar Ratio (Insert/Vector)